Implantação da técnica de detecção de anticorpos antiilhota pancreática
e sua aplicação em pacientes e irmãos de pacientes com diabetes mellitus tipo I


The implementation of the method for detection of pancreatic antiislet antibodies
and its aplication in patients and siblings of patients with type I diabetes


Tese de Mestrado (Master thesis)

Rosangela Roginski Réa

Universidade Federal do Paraná, Curitiba, Brasil

Resumo

Desde a primeira descrição dos anticorpos citoplasmáticos contra células da ilhota (ICAs) em pacientes com diabetes tipo I, estes marcadores humorais vem sendo progressivamente mais utilizados em investigação clínica. No presente estudo, um método para detecção dos ICAs foi implantado no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná. Os anticorpos foram determinados de acordo com um protocolo padrão baseado na técnica convencional de imunofluorescência indireta, em cortes de pâncreas humano realizado em criostato. ICAs foram primeiramente pesquisados utilizando-se 5 pâncreas diferentes e 10 amostras de soro. Um dos pâncreas foi selecionado para ser usado no resto do estudo, por comparação dos resultados com aqueles obtidos na Universidade de Minnesota. Uma curva padrão foi construída, baseada no título final de diluição obtido neste mesmo pâncreas para diferentes diluições do soro internacional de referência, possibilitando a expressão dos resultados em unidades JDF (Juvenile Diabetes Foundation). A prevalência dos ICAs foi então determinada em cinquenta crianças e jovens com diabetes tipo I recém-diagnosticado e em 40 irmãos não-afetados de pacientes com diabetes tipo I. A porcentagem encontrada de pacientes com ICAs na instalação do diabetes (66%) se encontra dentro da variação descrita por outros (50-84%). A freqüência relativamente alta de ICAs no grupo de irmãos (5%) exige testes futuros em um maior número de pessoas, com acompanhamento rigoroso.

Abstract

Since the first description of cytoplasmic islet cell antibodies (ICAs) in type I diabetic patients, these humoral markers have been increasingly applied in clinical investigations. In this study, a method for ICA detection was established at the Hospital de Clinicas of the Universidade Federal do Paraná. These antibodies were determined according to a standard protocol based on the conventional indirect-immunofluorescence technique on cryostat sections of human pancreas. ICAs were first determined using 5 different pancreata and 10 serum samples. One of the pancreas was selected to be used in the rest of the study, by comparison of the results with those obtained at the University of Minnesota. A standard curve was constructed based on end-point titers obtained on this same pancreas for different dillutions of the international reference serum, making it possible to express the results in JDF (Juvenile Diabetes Foundation) units. The prevalence of patients with ICA was then studied in 50 newly diagnosed children and juveniles with type I diabetes, and in 40 unaffected siblings of type I diabetic patients. The percentage of patients with ICA at onset of the disease (66%) was within the range reported by others (60-90%). The relatively high frequency of ICA in the group of siblings (5%) demands further testing in a greater number of persons and close follow-up.